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PCR实验室的污染类型有哪些？该怎样预防呢？

发布者：admin 发布时间：2021-08-10 16:43 阅读：

　　PCR实验室可以通过DNA基因追踪系统来掌握患者体内的病毒含量，具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是容易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。那么PCR实验室的污染类型有哪些？该怎样预防呢？

　　一、PCR实验室的污染类型

　　1、样本间交叉污染

　　标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染。标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染。有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。

　　2、PCR试剂的污染

　　主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

　　3、PCR扩增产物污染

　　这是PCR反应中最主要最常见的污染问题，因为PCR产物拷贝量大(一般为1013拷贝/mL)，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳性。

　　4、实验室中克隆质粒的污染

　　在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见。因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力，其污染可能性也很大。

　　二、PCR实验室的防污染方法

　　1、严格执行各区功能划分：

　　试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。

　　标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。

　　扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。

　　扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。

　　试剂准备区、样本制备区和扩增区内的实验用品，包括移液器等器具应专用，空气、物品流向依次为：试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区，不可逆行。

　　2、清洁的实验用品：

　　实验室自配试剂（去离子水、缓冲液等）和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。枪尖、反应管等实验耗材应一次性使用。

　　3、正确的实验操作：

　　实验应在超净工作台内进行，工作台内应放置PCR专用的微量离心机、各量程的移液器和其他必须物品。

　　实验的过程中选择最合适尺寸的手套并能及时更换，在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套，以避免不同实验区交叉污染。

　　装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心，将管壁及管盖上的液体离至管底，降低污染手套或加样器的风险；谨慎开启反应管，防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。

　　吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行，遵守“慢吸快打”原则，尽量一次性完成，忌多次抽吸，以避免气溶胶产生的交叉污染。

　　PCR试剂建议小量分装，以减少反复冻融、重复取样次数；多样本PCR反应时，先配制反应混合液分装至反应管中，最后加入样本核酸，请勿同时开盖，尽量保证单人单管，实现完全闭管操作。

　　实验试剂应与样品和PCR产物分开保存，不应放于同处。

　　PCR扩增实验完成后及时将反应管取出，用一次性手套将产物反应管包裹丢弃，保证管盖紧闭。

　　4、规范的实验设计：

　　应遵循实验室内部质量控制的相关规定，实验中设立阳性对照、阴性对照和空白对照，全程质控实验过程，验证PCR反应的可靠性，并协助判断扩增系统的可信性。

　　以上就是PCR实验室的污染来源及防污染措施。更多实验室相关产品信息，敬请关注河南中润实验工程公司官网，产品咨询及实验室EPC设计建设请联系网站客服。