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PCR实验室的污染来源及控制措施都有哪些？

发布者：中润官网发布时间：2021-07-29 16:08 阅读：

　　PCR实验室又叫基因扩增实验室。能够通过DNA基因追踪系统来掌握患者体内的病毒含量。它最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是容易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。那么PCR实验室的污染来源及控制措施都有哪些呢？

　　一、PCR实验室被污染的原因

　　1、标本间交叉污染

　　标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染。标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染。有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。

　　2、PCR试剂的污染

　　主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

　　3、PCR扩增产物污染

　　这是PCR反应中最主要最常见的污染问题，因为PCR产物拷贝量大(一般为1013拷贝/mL)，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳性。

　　4、实验室中克隆质粒的污染

　　在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见。因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力，其污染可能性也很大。

　　二、防止污染的方法

　　进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。

　　(一) 划分操作区：目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行：

　　1、试剂准备区。

　　2、标本制备区。

　　3、PCR扩增区及分析区。

　　各工作区要有一定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。如：试剂准备→标准制备→PCR扩增区及分析区。

　　切记：任何一间的产物及器材不要拿到其他两个工作区。

　　(二) 分装试剂：PCR扩增所需要的试剂均应在生物安全柜、装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA：

　　1、PCR用水应为高压的双蒸水。

　　2、引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制。

　　3、引物和dNTP应分装储存，分装时应标明时间，以备发生污染时查找原因。

　　(三) 实验操作注意事项

　　尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：

　　1、戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套。

　　2、使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染。

　　3、避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。

　　4、操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度。

　　5、最后加入反应模板，加入后盖紧反应管。

　　6、操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性。

　　7、尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器，至少PCR操作过程中加样器应该专用，不能交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区。

　　8、重复实验，验证结果，慎下结论。

　　以上就是PCR实验室的污染来源及控制措施。更多实验室相关产品信息，敬请关注河南中润实验工程公司官网，产品咨询及实验室EPC设计建设请联系网站客服。